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在使用熒光蛋白上樣緩沖液需要關注哪些細節(jié)?

發(fā)布日期: 2021-08-24
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  熒光蛋白上樣緩沖液在電泳前的樣品處理階段對SDS-PAGE的蛋白樣品進行預染,標記上熒光。實驗完成以后,凝膠中或轉膜后的蛋白條可直接通過紫外燈、LED燈或其他數(shù)字成像系統(tǒng)進行觀察和分析,無需染色脫色。熒光蛋白上樣緩沖液靈敏度高比銀染高。穩(wěn)定性強,背景低。可對所有蛋白進行染色,不影響蛋白的遷移率與電泳圖譜。電泳過程中,游離的染料分子與溴酚藍的遷移速率致,跑膠結束時移至凝膠末端,背景干凈。熒光蛋白上樣緩沖液非常適合用于追蹤蛋白表達純化以及Western blot的SDS-PAGE。

  熒光蛋白上樣緩沖液在進行蛋白樣品變性處理的同時對蛋白進行預染色,電泳結束后即可直接使用凝膠成像儀的紫外光源或者LED燈觀察電泳結果。免去了染色法染色脫色的過程,不增加任何其它操作步驟,不使用任何有機溶劑,保護環(huán)境,實驗室再無藍色污漬,電泳結束即可觀察實驗結果,節(jié)省了實驗時間。

  熒光蛋白上樣緩沖液在使用時應注意以下幾點:

  1. 請勿使用該上樣緩沖液處理預染的或預處理的蛋白分子量標準。這些產(chǎn)品與不兼容。
  2. 靈敏度影響因素:高pH(大于7)不會影響染色,低pH則會降低染色的效率,如果樣品的pH低于5,建議將pH調(diào)整7以上。
  3. 不適合在如下SDS-PAGE實驗中使用:切割蛋白條帶用以測序、質(zhì)譜分析或抗體制備。

  4. 建議-20℃避光保存,如果室溫放置2-3周,則可添加新的DTT,蛋白條帶會重新變得清晰和明亮。添加DTT的終濃度不要超過20 mM。也可以添加其他還原劑TCEP,效果也很好。

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