土壤硝酸還原酶（S-NR）活性檢測試劑盒說明書
微量法
貨號：BC3105
規(guī)格：100T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。

需自備的儀器和用品：
可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、恒溫培養(yǎng)箱/水浴鍋、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、30-50目篩、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）

新鮮土樣自然風(fēng)干或37度烘箱風(fēng)干，過30~50目篩。
二、測定步驟

1. 分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至520nm，分光光度計(jì)用蒸餾水調(diào)零。

2. NaNO₂標(biāo)準(zhǔn)液的配制：用蒸餾水將標(biāo)準(zhǔn)品稀釋1、0.8、0.6、0.4、0.2μmol/mL。

3. 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋表：

備注：實(shí)驗(yàn)中每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)管需50µL標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1. 樣本測定：

混勻，顯色20min后，取200μL至微量玻璃比色皿/96孔板，520nm下讀取各管吸光值，分別記為A測定、A對照、A標(biāo)準(zhǔn)、A空白。計(jì)算ΔA測定=A測定- A對照，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白。每個(gè)測定管需設(shè)一個(gè)對照管。標(biāo)準(zhǔn)曲線和空白管只需檢測1-2次。
三、S-NR活性計(jì)算
1、標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：
以1、0.8、0.6、0.4、0.2μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液為橫坐標(biāo)（x軸），ΔA標(biāo)準(zhǔn)為縱坐標(biāo)（y軸）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到線性回歸方程y=kx+b，將ΔA測定代入方程得到x（μmol/mL）。
2、S-NR活性計(jì)算：

單位的定義：每g土樣每天中產(chǎn)生1μmol NO₂ˉ的量為一個(gè)S-NR活力單位。
S-NR（U/g 質(zhì)量）=x×V標(biāo)準(zhǔn)÷W÷T=0.05x÷W
V標(biāo)準(zhǔn)：反應(yīng)體系中加入的標(biāo)準(zhǔn)液體積，0.05mL；W：風(fēng)干土樣，g；T：反應(yīng)時(shí)間，1d。
注意事項(xiàng)：

1. 試劑一、試劑二和試劑四在冰上放置，用不完的試劑-20℃分裝保存，避免反復(fù)凍融。

2. ΔA測定過?。ㄐ∮?span style="font-family:Times New Roman, Times, serif">0.01），可延長反應(yīng)時(shí)間（37℃水浴時(shí)間）。

3. 當(dāng)ΔA大于1時(shí)，可以將上清液用蒸餾水稀釋后，再進(jìn)行測定，計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。

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