土壤中性木聚糖酶（S-NEX）活性檢測試劑盒說明書

可見分光光度法

貨號：BC5730

規(guī)格：50T/24S

產(chǎn)品組成：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1、 標(biāo)準(zhǔn)品：10mg木糖。臨用前加入667μL蒸餾水配制成100μmol/mL的木糖標(biāo)準(zhǔn)液，2-8℃保存8周。

產(chǎn)品說明：

土壤中性木聚糖酶（Soil neutral xylanase, S-NEX），又稱為土壤中性半纖維素酶，主要分離自最適生長pH為6-8的微生物。

在中性環(huán)境中，S-NEX催化木聚糖降解成還原性寡糖和單糖，在沸水浴條件下進一步與3,5-二硝基水楊酸發(fā)生顯色反應(yīng)，在540nm處有特征吸收峰，反應(yīng)液顏色的深淺與酶解產(chǎn)生的還原糖量成正比，通過測定反應(yīng)液在540nm吸光值增加速率，可計算S-NEX活性。

注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計、1mL玻璃比色皿、天平、低溫離心機、水浴鍋、研缽、30~50目篩、蒸餾水。

操作步驟：具體的操作步驟請見“產(chǎn)品資料"文件

一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）

新鮮土樣自然風(fēng)干或37℃烘箱風(fēng)干，過30~50目篩。

二、測定步驟

1、 可見分光光度計預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至540nm，蒸餾水調(diào)零。

2、 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：臨用前將標(biāo)準(zhǔn)品用蒸餾水稀釋為1.5、1.2、1、0.8、0.6、0.4μmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液待測。

3、 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋表：

備注：實驗中每管需要300μL。

4、 樣本測定（在EP管中加入下列試劑）

注意事項：

1. 若樣本ΔA<0.01，可適當(dāng)增大樣本量或者延長50℃反應(yīng)時間后測定；若樣本ΔA>1.5或者A測定＞1.5時，可用蒸餾水稀釋上清液后測定，注意同步修改計算公式中的稀釋倍數(shù)。

2. 建議使用螺旋管，防止沸水浴過程中蓋子爆開，改變反應(yīng)體系。

實驗實例：

1、 取0.1g野蘑菇土，按操作表進行第一步反應(yīng)2h后，取上清液用蒸餾水稀釋2倍后按照測定步驟操作，用1mL玻璃比色皿測得ΔA測定=A測定- A對照=0.498-0.108=0.390，帶入標(biāo)曲y=0.5887x-0.1537（R²=0.9982），計算x=0.924，按樣本質(zhì)量計算S-NEX活性得：

S-NEX活性（U/g 土樣）=0.3× x÷W×F =5.544 U/g 土樣。

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